Бактериологический метод исследования в микробиологии — все, что нужно знать об анализе

Бактериологический метод исследования в микробиологии - все, что нужно знать об анализе Бактериологический метод исследования в микробиологии - все, что нужно знать об анализе

DEFENDER PREMIUM неопудренные, нестерильные, синие

УЗНАТЬ БОЛЬШЕ >

Бактериологический метод исследования в микробиологии - все, что нужно знать об анализе Бактериологический метод исследования в микробиологии - все, что нужно знать об анализе

Преобретите дозатор Sente-Lab и каждый рабочий день станет выходным!

УЗНАТЬ БОЛЬШЕ >

Бактериологический метод исследования в микробиологии - все, что нужно знать об анализе Бактериологический метод исследования в микробиологии - все, что нужно знать об анализе

Познакомься с ней ближе и жизнь станет легче!

УЗНАТЬ БОЛЬШЕ >

Бактериологический метод исследования в микробиологии - все, что нужно знать об анализе Бактериологический метод исследования в микробиологии - все, что нужно знать об анализе

Вас не устраивает качество предоставляемой продукции в лабораторию? Попробуйте поработать с нами. Вся наша продукция изготовлена по самим высоким мировым стандартам, имеет регистрационные свидетельства МОЗ Украины. Убедитесь в этом на собственном опыте. Сделайте пробный заказ.

УЗНАТЬ БОЛЬШЕ >

‹ ›

    
   
    
    

Бактериологическое исследование —  предназначенное для выделения бактерий и изучения их свойств с целью постановки микробиологического диагноза.Исследуемый материал следует брать в асептических условиях в стерильную посуду и доставлять в лабораторию как можно скорее. В случае необходимости пробы следует хранить на холоде.

Методика взятия проб зависит от объекта, характера заболевания и свойств микроорганизма. Одним из распространенных приемов бактериологического исследования является бактериоскопия.Для изучения нефиксированных бактерий пользуются двумя методами: раздавленной (между предметным и покровным стеклами) капли и висячей капли.

Следует помнить, что препараты нефиксированных бактерий заразны.К числу важнейших элементов бактериологического исследования относятся посевы и пересевы бактериальных культур, производимые бактериальной петлей или пастеровской пипеткой.

Петлю стерилизуют прокаливанием в пламени, затем ее остужают прикосновением к участку незасеянного агара или ополаскивая в стерильной жидкости. При использовании пастеровской пипетки ее кончик обламывают пинцетом, несколько раз проносят пипетку через пламя горелки и дают остыть. При посевах используют жидкие и твердые питательные среды.

При посеве на скошенный агар культуру бактерий растирают петлей по поверхности агара. При посеве в толщу агарового или желатинового столбика питательную среду прокалывают до дна пробирки петлей или особой иглой. При посеве в жидкую среду надо следить, чтобы жидкость не выливалась и не смачивала края пробирок и пробки.

Посевы и пересевы следует проводить вблизи пламени газовой горелки, пробирки не должны долго оставаться открытыми, петля или пастеровская пипетка с культурой не должна ни к чему прикасаться; перед тем как закрывать пробирку, края ее следует прожечь. Засеянные пробирки необходимо тотчас же надписать. 

Микробиологические методы исследования делятся на методы прямого обнаружения возбудителя в организме больного — бактериоскопическое и бактериологическое исследования; методы косвенного доказательства наличия возбудителя в организме больного — серологические исследования, направленные на обнаружение специфических антигенов в инфицированном материале или антител в сыворотке крови и различных секретах организма больного.Бактериоскопическое исследование крови, мочи, спинномозговой жидкости, слизи из зева и носа, кала и различных патологических субстратов на присутствие возбудителя применяют при многих инфекционных болезнях. Этот метод имеет довольно ограниченное применение, хотя и очень важен. Он используется, в частности, для обнаружения в крови возбудителей малярии, возвратного тифа, лептоспироза. Спинномозговую жидкость исследуют при гнойном и туберкулезном менингите, слизь из зева и носа — при дифтерии, ангине Венсана, кал — при амебиазе, балантидиазе, лямблиозе; мочу — при лептоспирозе. Палочки чумы, сибирской язвы можно увидеть в пунктате чумного бубона и мазках-отпечатках, взятых из сибиреязвенного карбункула; при микроскопии мазка пунктата из костного мозга и селезенки, грануляций из язвы можно обнаружить лейшмании; в мокроте — микобактерии туберкулеза. Преимущество бактериоскопического метода заключается в его быстроте. Результаты анализа могут быть получены через несколько часов. При некоторых заболеваниях (малярия, эпидемический цереброспинальный менингит и др.) возбудители могут быть обнаружены в организме больного уже в 1-й день болезни, что очень важно для своевременной диагностики и лечения. Значительно расширились возможности, бактериоскопической диагностики благодаря обработке препаратов специфическими сыворотками, содержащими антитела к данному возбудителю, меченные флуорохромами (иммунофлуоресцентный метод) или ферментами (иммуноферментный метод). При этом меченые антитела соединяются с антигеном, который выявляется при иммунофлуоресцентном методе под люминесцентным микроскопом, а при иммуноферментном методе — по окрашиванию продукта ферментативной реакции после введения субстратно-индикаторной смеси.Бактериологический метод диагностики основан на выделении возбудителя из крови, спинномозговой жидкости, мокроты, слизи из зева и носа, кала, мочи, желчи больного, а при летальных исходах — из кусочков органов, которые засевают на специальные питательные среды. Бактериологическая диагностика широко используется для исследования слизи из зева и носа на дифтерийные бактерии, для выделения возбудителей кишечных инфекций (например, холеры, дизентерии, сальмонеллезов, эшерихиозов) из кала больного, возбудителей пневмонии — из мокроты и в других случаях. При этом учитывают особенности предполагаемой инфекции, место избирательной локализации возбудителя и пути его выделения в окружающую среду. Исследование дает положительные результаты уже в первые часы или дни болезни. Однако окончательный ответ лаборатория при большинстве инфекционных болезней сообщает лишь через 2-4 дня, а при бруцеллезе, туберкулезе — через 3-4 недель. Это зависит от сроков, требующихся для роста микроорганизмов и их идентификации (биохимической и серологической). Каждый микроб для своего роста требует соответствующей питательной среды. В зависимости от того, какой микроб предполагают выделить (что определяется при клиническом и эпидемиологическом обследовании больного), выбирают соответствующую питательную среду. Иногда посев производят одновременно на несколько питательных сред. Ценность результатов бактериологических исследований во многом определяется тем, правильно ли взят материал у больного и правильно ли он доставлен в лабораторию. Инфекционный материал собирают в стерильную посуду, соблюдая правила асептики.

 Важнейшим этапом бактериологического исследования является идентификация — определение видовой или типовой принадлежности бактерий, полученных в виде чистой культуры. При идентификации бактерий производится изучение их физиологических и биохимических свойств, токсинообразования.

Широко используют серологические методы идентификации   бактерий. Во многих случаях эффективным оказывается биологический метод идентификации микроорганизмов, основанный на заражении лабораторных животных исследуемым материалом или полученной культурой бактерий и выявлении у животных характерных патологических изменений.

Для выделения чистых культур используют механические и биологические методы. Пример механического метода: каплю исследуемого материала растирают одним и тем же стерильным шпателем или бактериальной петлей по поверхности плотной питательной среды, последовательно в первой, второй и третьей чашках Петри.

Выделение чистой культуры производится из выросших отдельных колоний и заключается в их исследовании и отсеве на свежую питательную среду. Биологические методы выделения чистых культур основаны на учете того или иного свойства выделяемого микроба, отличающего его от других микробов, находящихся в исследуемом материале.

При биологическом методе используют такого рода питательные среды, в которых созданы условия, благоприятные для развития определенного вида микробов. К числу биологических методов относится также заражение лабораторных животных, чувствительных к выделяемому виду бактерий.

Бактериологическое исследование — комплекс методов для выявления патогенных микроорганизмов у больного, у носителя или на объектах внешней среды. 

Методы бактериологического исследования все шире внедряются в практику для более детального обследования больных, установления этиологического фактора воспалительного процесса, назначения рациональной терапии и определения ее эффективности. 

Разнообразие клинического материала и своеобразие микрофлоры отдельных органов определяют особенности методов бактериологического исследования, которые требуют применения специальных приемов отбора проб, посевов на питательные среды и проведения хода анализов. 

Бактериологическое исследование клинического материала состоит из нескольких этапов: 

  • — отбор проб на исследование; 
  • — посев на питательные среды; 
  • — выделение чистой культуры; 
  • — идентификация и дифференциация выделенных культур микроорганизмов; 
  • — анализ результатов исследования. 
  • Методы бактериологического исследования все шире внедряются в практику для более детального обследования больных, установления этиологического фактора воспалительного процесса, назначения рациональной терапии и определения ее эффективности. 
  • Разнообразие клинического материала и своеобразие микрофлоры отдельных органов определяют особенности методов бактериологического исследования, которые требуют применения специальных приемов отбора проб, посевов на питательные среды и проведения хода анализов. 
  • Бактериологическое исследование клинического материала состоит из нескольких этапов: 
  • — отбор проб на исследование; 
  • — посев на питательные среды; 
  • — выделение чистой культуры; 
  • — идентификация и дифференциация выделенных культур микроорганизмов; 
  • — анализ результатов исследования. 

При бактериологическом исследовании проводят так называемый посев собранного у больного материала на питательные среды, что способствует росту и размножению возбудителя заболевания. В ходе исследования можно выявить не только сам факт наличия, но и концентрацию патогенных микроорганизмов в том или ином биоматериале.

Методом бактериологического исследования исследуют мокроту, ликвор, кровь, а также отделяемое из половых органов, ротовой полости, зева и ран пациента. Таким образом, микроорганизмы можно высевать практически с любого участка организма человека.

Методика бактериологического посева чрезвычайно удобна и эффективна для обнаружения и определения вида бактерий и грибков. Определенную сложность представляет обнаружение вирусов в связи с особенностями их биологии.

Бактериологическое исследование (посевы) имеет огромное значение не только для определения конкретного типа микроорганизма, но и установления степени чувствительности к нему того или иного антибиотика. Таким образом, определяется максимальная эффективность того или иного вида антибиотикотерапии.При проведении анализа важно помнить, что некоторые микроорганизмы, например пневмококки, довольно быстро погибают, поскольку имеют повышенную тенденцию к саморазрушению. Таким образом, посевы необходимо делать в короткие сроки.

Источник: http://sente-lab.com/novinki-iz-laboratornogo-mira/bakteriologicheskie-issledovaniya.html

Бактериологический метод исследования в микробиологии — важность метода и основные этапы

Одним из самых достоверных методов исследования, который проводится в лабораториях больниц и поликлиник является бактериологический.

Бакпосев сложный, но очень важный анализ в микробиологии, по которому можно точно сказать, каким возбудителем вызвано недомогание.

Суть бактериологического метода исследования

Бактериологический метод исследования в микробиологии - все, что нужно знать об анализе

Бактериологический метод исследования представляет собой взятие у человека биологического материала с целью его дальнейшего исследования, причем исследоваться будет материал на наличие в нем определенных бактерий.

Для этого, собранное содержимое пробирок будет помещено в специальные среды, в которых бактерии будут «выращиваться».

И по тому, где есть рост и размножение, и будет определен источник инфекции. Такой тип исследования распространен в сфере инфекционных заболеваний, когда для выбора правильного лечения необходимо точно знать возбудителя, так как некоторые бактерии устойчивы даже к самым сильным антибиотикам широкого спектра действия.

Читайте также:  Рези после мочеиспускания у женщин - причины, лечение и возможные осложнения

К тому же, такой тип исследования применяется многими санитарно-эпидемиологическими проверками на предприятиях общественного питания для того, чтобы предупредить распространение того или иного заболевания.

На сегодняшний день бактериологический метод, или как проще сказать бакпосев, используется часто, причем главная задача специалиста состоит в том, чтобы взять у человека материал до того момента, пока ему не начнут проводить противомикробную терапию.

Почему анализ так важен в микробиологии?

Бактериологический метод исследования в микробиологии - все, что нужно знать об анализе

Бактериологический метод исследования в микробиологии важен потому, что позволяет изучить бактерии, понаблюдать за ними в благоприятной для них среде, а также изучить реакцию на тот или иной препарат.

К тому же, благодаря исследованию бактерий на сегодняшний день стало возможным определить, какой возбудитель вызывает то или иное заболевание, и спасти множество жизней. Именно поэтому этот метод занимает такое важное место в микробиологии.

Забор материала

Для того чтобы получить максимально достоверные результаты, работнику лаборатории или медицинской сестре необходимо соблюсти все гигиенические процедуры, а также хорошо простерилизовать инструмент. И только после этого можно брать образцы.

Чаще всего у человека берут материалы для бактериологического исследования:

Материал Особенности анализа
Кал Обычно такой анализ назначается, если у человека имеются все симптомы кишечной инфекции. Сделать это необходимо, потому что практически все бактерии, попавшие в организм, оказывают разрушительное действие, да и не каждый антибиотики способен положительно воздействовать на все типы возбудителей.
Слизь из носоглотки и зева Чаще всего анализы из носоглотки и зева берутся в случае частой ангины, а также надолго затянувшего насморка, потому что в большинстве случаев если такое случается, то возбудитель оказывается намного серьезнее, чем предполагают врачи до получения результатов.
Мокрота их бронхов Если у человека воспаление легких, то его точно направят на сдачу этого анализа.
Моча Моча у пациента для бактериологического исследования берется в случае подозрения на инфекцию мочеполовой системы.
Спинномозговая жидкость Иногда пациенты поступают в больницу с параличом конечностей, но при этом никаких симптомов других болезней у него нет, то есть с мозговой активностью все в порядке, с проводимостью по нервным окончаниям тоже. Здесь причина может крыться в проникновении инфекции в спинной мозг. Именно поэтом, чтобы как можно быстрее выяснить причину, необходимо взять посев.
Кровь В норме кровь – стерильная среда, в которой бактерий быть не должно. Состояния бактериемии, септицемии и сепсиса характерны для воспалительных процессов, имеющих множественные очаги. Чтобы выявить подобные патологии, назначают посев крови. Исследуемый материал берут из вены, затем помещают на питательную среду. Наиболее часто выявляемые возбудители – стафилококк, стрептококк, синегнойная палочка.
Бакпосев из глаза Показания к бакпосеву: воспалительный процесс в конъюнктиве, роговице, радужке или вспомогательном аппарате глаза, гнойные выделения из глаза. Большинство капель для глаз с антибиотиками имеют широкий спектр действия, но существуют нюансы их назначения, для которых необходим бактериологический анализ.
Бакпосев из уха Его назначают для диагностики наружных и средних отитов. Для процедуры используется соскоб отделяемого из наружного слухового прохода. Не выполняется после перфорации барабанной перепонки – есть риск ухудшить состояние пациента.
Бакпосев желчи Желчь также в норме не содержит бактерий, как и кровь. Они появляются при поражении печени инфекционным процессом – абсцессом, гнойным холециститом и холангитом. Желчь для исследования получают во время зондирования двенадцатиперстной кишки. При этом обязательно встречаются нормальные кишечные микроорганизмы, но они не учитываются в результатах анализа.
Бакпосев из уретры у мужчин Используется для диагностики болезней, передаваемых половым путем. Для анализа требуется взять мазок со слизистой уретры до мочеиспускания. Процедура достаточно болезненна, поэтому по возможности заменяется бактериологическим анализом мочи.
Бакпосев из цервикального канала  Используется для определения болезней, передаваемых половым путем, у женщин. Для исследования берется материал из шейки матки, забор выполняется на гинекологическом кресле во время осмотра. Различают две разновидности – мазок на степень чистоты и собственно бакпосев. Мазок предполагает количественное определение бактерий. Материал помещают на среду, в которой хорошо растут патогенные бактерии и плохо – нормальные бактерии влагалища. По количеству колоний определяется одна из 4 степеней чистоты мазка. Бакпосев – это определение конкретных видов возбудителей на слизистой влагалища и шейки матки затем, чтобы назначить наиболее эффективное лечение.
Бак посев с кожи лица Такой метод диагностики используется для определения причины угревой сыпи и воспалительных процессов на лице. По результатам возможно назначение антибиотиков в виде мазей или таблеток. Исследуемый материал – мазок собственно с кожи или из отдельных очагов воспаления.
Бакпосев на микрофлору Выполняется для выявления носителей инфекции. Чаще всего выполняется с кожи рук, полости рта и носа, а также из анализов кала. Такую процедуру регулярно проходят люди, работающие на пищевых предприятиях, а также в детских учреждениях. При приеме на работу во многих случаях требуется санитарная книжка, которая включает в том числе анализ на микрофлору.

Именно благодаря этим материалам из человеческого организма можно провести точное исследование и выявить проблему. Правда, несмотря на множество достижений в микробиологии, бактериологический посев делает не так быстро.

  • Читайте:  Гемолитический стрептококк группы А: признаки и методы лечения инфекции

Источник: https://medist.info/bakteriologicheskiy-metod-issledovaniya-v-mikrobiologii-vazhnost-metoda-i-osnovnye-etapy/

Методы исследований в микробиологии

ВведениеМикроскопический метод исследованияМикробиологический методБиологический методСерологический методАллергологический методЗаключениеИсточники

Введение

В настоящее время проведение микробиологических исследований является важной и актуальной деятельностью в биологии и медицине, так как они позволяют с высокой степенью точности и достоверности подтвердить или опровергнуть факт присутствия в организме (или другом исследуемом объекте) возбудителей инфекционных заболеваний. Классические микробиологические методы исследования решают задачи выделения чистой культуры возбудителя с его последующей идентификацией по биохимическим, антигенным и другим признакам [1]. Основу микробиологической диагностики инфекционных заболеваний составляют микроскопические, микробиологические, биологические, серологические и аллергологические методы [3]. Благодаря микробиологическим методам исследования можно установить возбудителей тех или иных инфекционных заболеваний и подобрать правильный метод лечения этого заболевания.

  • Цель: Описать основные микробиологические методы исследований, применяемых в биологии и медицине.
  • Задачи: — охарактеризовать основные методы исследований в микробиологии по литературным источникам;
  • — ознакомить учащихся с основными микробиологическими методами исследований в кратком изложении.

Микроскопический метод

Микроскопические методы исследования – это способы изучения очень мелких, неразличимых невооруженным глазом объектов с помощью микроскопов. Широко применяются в бактериологических, гистологических, цитологических и других исследованиях.

Микроскопические методы исследований включают в себя приготовление мазков и препаратов для микроскопирования.

В большинстве случаев результаты микроскопических исследований носят ориентировочный характер (например, определяют отношение возбудителей к окраске), так как многие микроорганизмы лишены явных морфологических (т.е. структурных) внешних и внутренних особенностей.

Тем не менее микроскопией материала можно определить некоторые морфологические признаки возбудителей (например, наличие ядер, жгутиков, внутриклеточных включений и т.д.), а также установить сам факт наличия или отсутствия микроорганизмов в исследуемых образцах.

Существуют световая, фазово-контрастная, темнопольная (ультрамикроскопия), люминесцентная, поляризационная, ультрафиолетовая и электронная микроскопия [2].

Микробиологический метод

Микробиологические методы исследований — «золотой стандарт» микробиологической диагностики, так как результаты микробиологических исследований позволяют точно установить факт наличия возбудителя в исследуемом материале.

Идентификацию чистых культур (до вида микроорганизма) проводят с учётом морфологических, культуральных, биохимических, антигенных свойств микроорганизма. Большинство исследований включает также определение чувствительности к антимикробным препаратам (например, к антибиотикам) у выделенного возбудителя.

Для эпидемиологической оценки роли микроорганизма проводят внутривидовую идентификацию определением фаговаров, биоваров и т.д.

Биологический метод

Биологические методы исследований направлены на определение наличия токсинов возбудителя в исследуемом материале и на обнаружение самого возбудителя (особенно при его незначительном исходном содержании в исследуемом образце). Методы включают в себя заражение лабораторных животных исследуемым материалом с последующим выделением чистой культуры патогена либо установлением факта присутствия микробного токсина и его природы.

Моделирование экспериментальных инфекций у чувствительных животных — важный инструмент изучения патогенеза заболевания и характера взаимодействий внутри системы микроорганизм-макроорганизм. Для проведения биологических проб используют только здоровых животных определённой массы тела и возраста.

Инфекционный материал вводят внутрь, в дыхательные пути, внутривенно, внутримышечно, подкожно, в переднюю камеру глаза, через трепанационное отверстие черепа, субокципитально (в большую цистерну головного мозга).

У животных прижизненно забирают кровь, экссудат (скопившуюся жидкость) из брюшной полости, после гибели — кровь, кусочки различных органов, экссудаты из различных полостей [3].

Серологический метод

Серологические методы исследований для выявления специфических антител и антигенов возбудителя — важный инструмент в диагностике инфекционных заболеваний. Особую ценность они имеют в тех случаях, когда выделить возбудителя не представляется возможным. При этом необходимо выявить повышение титров антител (т.е.

их концентрации), в связи с чем исследуют парные образцы сыворотки, взятые в интервале 10-20 суток (иногда этот интервал может быть более длительным).

Aнтитела обычно появляются в крови на 1-2-ю неделю заболевания и циркулируют в организме относительно долго, что позволяет использовать их выявление для эпидемиологических исследований.

Особое значение имеют методы выявления микробных антигенов, порождающих антитела. В значимых количествах они появляются уже на самых ранних сроках, что делает их идентификацию важным инструментом экспресс-диагностики инфекционных заболеваний, а количественное их определение в динамике инфекционного процесса служит критерием эффективности проводимой антимикробной терапии.

Читайте также:  Как можно заразиться вич-инфекцией - пути заражения и основные признаки заболевания

Аллергологический метод

Антигены многих возбудителей обладают сенсибилизирующим действием, т.е. способны вызывать аллергические реакции. Это используют для диагностики инфекционных заболеваний, а также при проведении эпидемиологических исследований.

Наибольшее распространение нашли кожно-аллергические пробы, включающие внутрикожное введение Аг (аллергена). Кожные пробы нашли применение в диагностике таких заболеваний как сап, мелиоидоз, бруцеллёз.

Наиболее известна проба Манту, используемая как для диагностики туберкулёза, так и для оценки невосприимчивости организма к возбудителю [4].

Заключение

В данной работе были кратко описаны основные методы исследований в микробиологии (микробиологические методы исследований): 1. Микроскопический метод.2. Микробиологический метод.3. Биологический метод.4. Серологический метод.

5. Аллергологический метод.

С помощью методов, применяемых в микробиологии, люди научились выявлять и определять различного рода возбудителей тех или иных инфекционных заболеваний. Правильно выбранный метод способствует в дальнейшем правильному лечению заболеваний.

В настоящее время наиболее широко используются микроскопический, микробиологический и биологический методы исследования, потому что именно благодаря этим методам можно выявить причину возникновения и проявления инфекционных болезней у живых организмов и дать верную характеристику возбудителям этих болезней.

Источники:

Источник: http://kineziolog.su/content/metody-issledovaniy-v-mikrobiologii

Лекция №4. Микробиологические методы исследования

  • Объект изучения медицинских микробиологических лабораторий — патогенные биологические агенты (ПБА) — патогенные для человека микроорганизмы (вирусы, бактерии, грибы, простейшие), генно-инженерно модифицированные микроорганизмы, яды биологического происхождения (токсины), гельминты, а также материал (включая кровь, биологические жидкости и экскременты организма человека), подозрительный на содержание ПБА.
  • В зависимости от выполняемых исследований, микробиологические лаборатории подразделяют на диагностические, производственные и научно-исследовательские. В соответствии с типами микроорганизмов, изучаемых в микробиологических лабораториях, выделяют:
  • бактериологические,
  • вирусологические,
  • микологические и
  • протозоологические лаборатории.
  • С возбудителями инфекционных заболеваний работают только в специализированных микробиологических лабораториях, обеспечивающих безопасность её персонала и невозможность «утечки» патогенных микроорганизмов за пределы лаборатории.

Регламентация условий работы с возбудителями инфекционных заболеваний произведена в соответствии со степенью опасности микроорганизмов для человека. По этому признаку выделено четыре группы возбудителей инфекционных заболеваний.

Группа I возбудителей инфекционных заболеваний: возбудители особо опасных инфекций: чума, натуральная оспа, лихорадки Ласса, Эбола и др.

Группа II возбудителей инфекционных заболеваний: возбудители высококонтагиозных бактериальных грибковых и вирусных инфекций: сибирская язва, холера, лихорадка Скалистых гор, сыпной тиф, бластомикоз, бешенство и др. В эту группу также включён ботулотоксин (но не сам возбудитель ботулизма).

Группа III возбудителей инфекционных заболеваний: возбудители бактериальных грибковых, вирусных и протозойных инфекций, выделенных в отдельные нозологические формы (возбудители коклюша, столбняка, ботулизма, туберкулёза, кандидоза, малярии, лейшманиоза, гриппа, полиомиелита и др.). В эту группу также включены аттенуированные штаммы бактерий групп I, II и III.

  1. Группа IV возбудителей инфекционных заболеваний: возбудители бактериальных, вирусных, грибковых септицемии, менингитов, пневмоний, энтеритов, токсикоинфекций и острых отравлений (возбудители анаэробных газовых инфекций, синегнойной инфекции, аспергиллеза, амебиаза, аденовирусы, герпесвирусы и др.)
  2. В зависимости от уровня безопасности работы с микроорганизмами микробиологические лаборатории подразделяют на четыре группы риска.
  3. Первая группа риска микробиологических лабораторий: лаборатории особого режима (максимально изолированные) с высоким индивидуальным и общественным риском.
  4. Вторая группа риска микробиологических лабораторий: режимные лаборатории (изолированные) с высоким индивидуальным и низким общественным риском.
  5. Третья группа риска микробиологических лабораторий: базовые (основные) лаборатории с умеренным индивидуальным и ограниченным общественным риском.
  6. Четвёртая группа риска микробиологических лабораторий: базовые (основные) лаборатории с низким индивидуальным и общественным риском.
  7. В системе Министерства здравоохранения и Государственного комитета санитарно-эпидемиологического надзора РФ наиболее разветвлена сеть бактериологических лабораторий. В соответствии с выполняемыми задачами выделяют;
  8. • бактериологические лаборатории в составе ЛПУ;
  9. • бактериологические лаборатории в составе комитетов Госсанэпиднадзора;
  10. • учебные бактериологические лаборатории вузов;
  11. • проблемные и отраслевые бактериологические лаборатории научно-исследовательских институтов и предприятий по выпуску бактерийных препаратов;
  12. • специализированные бактериологические лаборатории по контролю за особо опасными инфекциями;

• специализированные бактериологические лаборатории по контролю за отдельными группами бактерий: микобактериями, риккетсиями, лептоспирами и др. Большая часть микробиологических лабораторий работает с ПБА групп III и IV, а изучением возбудителей особо опасных инфекций (группы I и II) занимаются только специализированные лаборатории.

Работу с патогенными биологическими агентами ( ПБА ) групп III и IV выполняют специалисты с высшим и средним специальным образованием. К ней допускают сотрудников, прошедших инструктаж по соблюдению требований безопасности работы с ПБА; последующий инструктаж следует проводить не реже одного раза в год.

Все сотрудники, работающие с патогенными биологическими агентами ( ПБА ), должны находиться на диспансерном учёте. Приборы, оборудование и средства измерения должны быть аттестованы, технически исправны и иметь технический паспорт.

Их метрологический контроль и техническое освидетельствование следует проводить в установленные сроки.

Из правил работы в грязной зоне базовой микробиологической лаборатории: Перед работой в микробиологической лаборатории следует проверить качество посуды, пипеток, шприцев и другого оборудования. При пипетировании необходимо пользоваться только резиновыми грушами или автоматическими устройствами.

Строго запрещено пипетировать материал ртом, переливать его через край сосуда (пробирки, колбы), а также оставлять без надзора рабочее место во время выполнения любых работ с патогенными биологическими агентами ( ПБА ). В грязной зоне микробиологической лаборатории запрещается курить, пить воду, хранить верхнюю одежду, головные уборы, обувь, пищевые продукты.

В помещения зоны нельзя приводить детей и домашних животных. Окончание работы в микробиологической лаборатории После окончания работы в микробиологической лаборатории все объекты, содержащие ПБА, должны быть убраны в хранилища (холодильники, термостаты, шкафы) с обязательной дезинфекцией столов.

Использованные пипетки полностью (вертикально) погружают в дезинфицирующий раствор, избегая образования пузырьков в каналах. Остатки ПБА, использованную посуду и оборудование собирают в закрывающиеся ёмкости и передают в автоклавную. Категорически запрещено сливать отходы с патогенными биологическими агентами ( ПБА ) в канализацию без предварительного обеззараживания.

После окончания работы с патогенными биологическими агентами ( ПБА ) и заражёнными животными, а также после ухода из лаборатории следует тщательно вымыть руки.

Цель микробиологических исследований — установить факт наличия или отсутствия возбудителя в организме больного и на объектах окружающей среды (индефецировать)

Задачи микробиологических исследований — идентифицировать микроорганизмы в исследуемом материале, определить их видовую принадлежность, морфологические, биохимические, токсигенные и антигенные свойства, а также установить чувствительность выделенных микроорганизмов к антимикробным препаратам.

Несмотря на то что проведение микробиологических исследований относится к компетенции микробиологов, каждый медицинский работник, имеющий дело с инфекционными заболеваниями, должен знать, как и когда необходимо отбирать материал для исследований, на какие исследования его направлять и как интерпретировать полученные результаты.

Первый этап любого микробиологического исследования составляет правильный выбор материала для исследования. Его определяют свойства возбудителя и патогенез вызываемого им заболевания. При поражениях отдельных органов и систем целесообразно отбирать материал соответствующей локализации.

При отсутствии поражений исследуют кровь, а затем отбирают образцы с учётом клинической картины заболевания и доступности материала для исследования.

Так, при лихорадке неясного генеза первоначально проводят посев крови; затем, при появлении симптомов более конкретных проявлений, например пневмонии, проводят забор мокроты.

• Образцы материала для микробиологического исследования следует забирать до назначения антимикробной терапии, с соблюдением правил асептики для предупреждения загрязнения материала. Каждый образец следует рассматривать как потенциально опасный.

При заборе, транспортировке, хранении и работе с ним необходимо соблюдать правила биологической безопасности. Материал собирают в объёме, достаточном для всего комплекса исследований.

Микробиологические исследования следует начинать немедленно после поступления образца в лабораторию.

• Выбор материала для микробиологического исследования должен соответствовать характеру инфекционного процесса. Так, например, при установлении этиологии пневмонии материалом должна быть мокрота, а не слюна, а при раневых инфекциях отделяемое следует забирать из глубины раны, а не с её поверхности.

Виды микробиологических исследований.

Основу микробиологической диагностики инфекционных заболеваний составляют микроскопические, микробиологические, биологические, серологические и аллергологические методы.

Микроскопические методы исследований включают приготовление мазков и препаратов для микроскопирования.

В большинстве случаев результаты микроскопических исследований носят ориентировочный характер (например, определяют отношение возбудителей к окраске), так как многие микроорганизмы лишены морфологических и тинкториальных (особенности окрашивания) особенностей.

Тем не менее микроскопией материала можно определить некоторые морфологические признаки возбудителей (наличие ядер, жгутиков, внутриклеточных включений и т.д.), а также установить факт наличия или отсутствия микроорганизмов в присланных образцах.

Микробиологические методы исследований — «золотой стандарт» микробиологической диагностики, так как результаты микробиологических исследований позволяют точно установить факт наличия возбудителя в исследуемом материале.

Идентификацию чистых культур (до вида микроорганизма) проводят с учётом морфологических, тинкториальных, культуральных, биохимических, токситенных и антигенных свойств микроорганизма. Большинство исследований включает определение чувствительности к антимикробным препаратам у выделенного возбудителя.

Для эпидемиологической оценки роли микроорганизма проводят внутривидовую идентификацию определением фаговаров, биоваров, резистентваров и т.д.

Биологические методы исследований направлены на определение наличия токсинов возбудителя в исследуемом материале и на обнаружение возбудителя (особенно при незначительном исходном содержании в исследуемом образце).

Методы включают заражение лабораторных животных исследуемым материалом с последующим выделением чистой культуры патогена либо установлением факта присутствия микробного токсина и его природы.

Моделирование экспериментальных инфекций у чувствительных животных — важный инструмент изучения патогенеза заболевания и характера взаимодействий внутри системы микроорганизм-макроорганизм. Для проведения биологических проб используют только здоровых животных определённых массы тела и возраста.

Инфекционный материал вводят внутрь, в дыхательные пути, внутрибрюшинно, внутривенно, внутримышечно, внутрикожно и подкожно, в переднюю камеру глаза, через трепанационное отверстие черепа, субокципитально (в большую цистерну головного мозга). У животных прижизненно забирают кровь, экссудат из брюшины, после гибели — кровь, кусочки различных органов, СМЖ, экссудат из различных полостей.

Серологические методы исследований выявления специфических AT и Аг возбудителя — важный инструмент в диагностике инфекционных заболеваний. Особую ценность они имеют в тех случаях, когда выделить возбудитель не представляется возможным.

Читайте также:  Кровь на рв сдается натощак: основные рекомендации к подготовке перед анализом

При этом необходимо выявить повышение титров AT, в связи с чем исследуют парные образцы сыворотки, взятые в интервале 10-20 сут (иногда этот интервал может быть более длительным).

AT обычно появляются в крови на 1-2-ю неделю заболевания и циркулируют в организме относительно долго, что позволяет использовать их выявление для ретроспективных эпидемиологических исследований.

Определение классов Ig чётко характеризует этапы инфекционного процесса, а также может служить косвенным прогностическим критерием, Особое значение имеют методы выявления микробных Аг. В значимых количествах они появляются уже на самых ранних сроках, что делает их идентификацию важным инструментом экспресс-диагностики инфекционных заболеваний, а количественное их определение в динамике инфекционного процесса служит критерием эффективности проводимой антимикробной терапии.

Аллергологические методы исследования Антигены многих возбудителей обладают сенсибилизирующим действием, что используют для диагностики инфекционных заболеваний, а также при проведении эпидемиологических исследований.

Наибольшее распространение нашли кожно-аллергические пробы, включающие внутри-кожное введение Аг (аллергена) с развитием реакции ГЗТ. Кожные пробы нашли применение в диагностике таких заболеваний как сап, мелиоидоз, бруцеллёз.

Наиболее известна проба Манту, используемая как для диагностики туберкулёза, так и для оценки невосприимчивости организма к возбудителю.



Источник: https://infopedia.su/1x1cca.html

9. Бактериологический метод диагностики инфекционных заболеваний

  • Основным методом микробиологической
    диагностики и «золотым стандартом»
    микробиологии, является бактериологический
    метод.
  • Цель бактериологического методазаключается в выделении чистой культуры
    возбудителя заболевания из исследуемого
    материала, накопление чистой культуры
    и идентификация данной культуры по
    набору свойств: морфологических,
    тинкториальных, культуральных,
    биохимических, антигенных, по наличию
    факторов патогенности, токсигенности
    и определение его чувствительности к
    антимикробным препаратам и бактериофагам.
  • Бактериологический метод исследования
    включает:
  • 1. посев исследуемого материала в
    питательные среды
  • 2. выделение чистой культуры

3. идентификацию микроорганизмов
(определение принадлежности к виду).

  1. Выделение и идентификация чистых культур
    аэробных и анаэробных бактерий
    предусматривает проведение следующих
    исследований:
  2. I этап (работа с нативным материалом)
  3. Цель: получение изолированных колоний
  4. 1. Предварительная микроскопия дает
    ориентировочное представление о
    микрофлоре
  5. 2. Подготовка материала к исследованию
  6. 3. Посев на плотные питательные среды
    для получения изолированных колоний
  7. 4. Инкубация при оптимальной температуре,
    чаще всего 37°С, в течение 18-24 часов
  8. II этап
  9. Цель: получение чистой культуры

1. Макроскопическое изучение колоний в проходящем и отраженном свете
(характеристика величины, формы, цвета,
прозрачности, консистенции, структуры,
контура, поверхности колоний).

2. Микроскопическое изучение изолированных
колоний

3. Постановка пробы на аэротолерантность
(для подтверждения присутствия в
исследуемом материале строгих анаэробов).

4. Посев колоний, характерных для
определенного вида, на среды накопления
чистой культуры или элективные среды
и инкубация в оптимальных условиях.

  • III этап
  • Цель: идентификация выделенной чистой
    культуры
  • 1. Для идентификации выделенной культуры
    по комплексу биологических свойств
    изучается:
  • морфология и тинкториальные свойства
  • культуральные свойства (характер роста на питательных средах)
  • биохимические свойства (ферментативная активность микроорганизмов)
  • серологические свойства (антигенные)
  • вирулентные свойства (способность к продукции факторов патогенности: токсины, ферменты, факторы защиты и аггресии)
  • патогенность для животных
  • фаголизабельность (чувствительность к диагностическим бактериофагам)
  • чувствительность к антибиотикам
  • другие индивидуальные свойства

IV этап (Заключение)

По изученным свойствам делают заключение
о выделенной культуре

Первый этап исследований.Исследование
патологического материала начинается
с микроскопии.

Микроскопия окрашенного
нативного материала позволяет установить
ориентировочно состав микробного
пейзажа изучаемого объекта, некоторые
морфологические особенности
микроорганизмов.

Результаты микроскопии
нативного материала, во многом определяют
ход дальнейшего исследования, впоследствии
их сопоставляют с данными, полученными
при посевах на питательные среды.

При достаточном содержании патогенных
микроорганизмов в образце проводят
посев на плотные питательные среды (для
получения изолированных колоний). Если в исследуемом материале бактерий мало,
то посев проводят на жидкие питательные
среды обогащения. Питательные среды
выбирают соответственно требовательности
микроорганизмов.

Культивирование микроорганизмов
возможно только при создании оптимальных
условий их жизнедеятельности и соблюдении
правил, исключающих контаминацию
(случайное загрязнение посторонними
микробами) исследуемого материала.
Искусственные условия, которые исключили
бы загрязнение культуры другими видами,
можно создать в пробирке, колбе или
чашке Петри.

Вся посуда и питательные
среды должны быть стерильными и после
посева микробного материала защищены
от загрязнения извне, что достигается
с помощью пробок или металлических
колпачков и крышек.

Манипуляции с
исследуемым материалом должны проводится
в зоне пламени спиртовки для исключения
контаминации материала из внешней
среды, а также в целях соблюдения техники
безопасности.

Посевы материала на питательные среды
должны быть сделаны не позднее 2 часов
с момента их забора.

Второй этап исследований. Изучение
колоний и выделение чистых культур.
Через сутки инкубации на чашках
вырастают колонии, причем на первом
штрихе рост сплошной, а на следующих –
изолированными колониями. Колония –
это скопление микробов одного вида,
выросших из одной клетки.

Таккак
материал представляет собой чаще всего
смесь микробов, то вырас­тает
несколько видов колоний. Карандашом
маркируют разные колонии,очерчивая
их кружком со стороны дна, и изучают их
(табл. 11). Прежде всего, изу­чают
колонии невооруженным глазом:
макроскопические признаки.

Чашку
просматривают
(не открывая ее) со стороны дна в проходящем
свете, отмечают прозрачность колоний
(прозрачная, если не задерживает свет;полупрозрачная,
если частично задерживает свет;
непрозрачная, если свет через колонию
не проходит), измеряют (в мм) размер
колоний.

Затем изучают колонии со стороны
крышки, отмечают форму (правильная
круглая, неправильная, плоская, выпуклая),
характер поверхности (гладкая,
блестящая, тусклая, шероховатая,
морщинистая, влажная, сухая, слизистая),
цвет (бесцветная, окрашенная).

Таблица 11. Схема
изучения колоний

Признак Возможные характеристики колоний
1. Форма Плоская, выпуклая, куполообразная, вдавленная, круглая, розеткообразная, звездчатая
2. Величина, мм Крупные (4-5 мм), средние (2-4 мм), мелкие (1-2 мм), карликовые (< 1 мм)
3. Характер поверхности Гладкая (S-форма), шероховатая (R-форма), слизистая (М-форма), исчерченная, бугристая, матовая, блестящая
4. Цвет Бесцветные, окрашенные
5. Прозрачность Прозрачные, непрозрачные, полупрозрачные
6. Характер краев Ровные, зазубренные, бахромчатые, волокнистые, фестончатые
7. Внутренняя структура Гомогенная, зернистая, неоднородная
8. Консистенция Вязкая, слизистая, крошковидная
9. Эмульгирование в капле воды Хорошо, плохо

Примечание: 5-7 пункты изучаются при
малом увеличении микроскопа.

Еще лучше можно увидеть
различия колоний при рассмотрении их
с увеличением.

Для этого закрытую чашку
дном кверху помещают на предметный
столик, слегка опускают конденсор,
используют неболь­шое увеличение
объектива (х8), передвигая чашку, изучают
у колоний микроскопические признаки:
характер края (ровные, волнистые,
зазубренные,
фестончатые), структуру (гомогенная,
зернистая, волокнистая, однородная,
или различающаяся в
центре и по периферии).

Далее
изучают морфологию микробных клеток
из колоний. Для это­го
из части каждой из отмеченных колоний
делают мазки, окрашивают по
Граму.

Во время взятия колоний обращают
внимание на консистенцию (сухая,
если колония крошится и берется с трудом;
мягкая, если берется
легко на петлю; слизистая, если колония
тянется за петлей; твердая,
если часть колонии не берется петлей,
можно снять только всю колонию).

При
просмотре мазков устанавливают, что
колония представлена одним
видом микроба, следовательно, могут
быть выделены чистые куль­туры
бактерий. Для этого из изученных колоний
делают пересев на скошенный
агар.

При пересеве
из колоний нужно тщательно следить,
чтобы взять именно
намеченные колонии, не задевая петлей
близлежащих колоний. Пробирки
подписывают и инкубируют в термостате
при температуре 37°С
в течение 24 часов.

Третий
этап исследований.
Идентификация
выделенной культуры. Идентификация
микробов – определение систематического
поло­жения
выделенной из материала культуры до
вида и варианта. Первым условием
надежности идентификации является
безусловная чистота культуры.

Для идентификации микробов используют
комплекс признаков: морфологические
(форма, размеры, наличие жгутиков,
капсулы, спор, взаим­ного
расположения в мазке), тинкториальные
(отношение к окраске по Граму
или другим методам), химические
(соотношение гуанина+цитозина вмолекуле ДНК),
культуральные (питательные потребности,
условия куль­тивирования,
темп и характер роста на различных
питательных средах), ферментативные
(расщепление различных веществ с
образованием про­межуточных
и конечных продуктов), серологические
(антигенная структура, специфичность),
биологические (вирулентность для
животных, токсигенность,
аллергенность, влияние антибиотиков и
др.).

Для
биохимической дифференциации изучают
способность бактерий сбраживать
углеводы с образованием промежуточных
иконечных
продуктов,
способность разлагать белки и пептоны
и изучают окислительно-восстановительные
ферменты.

Для
изучения сахаролитических ферментов
выделенные культуры засевают
в пробирки с полужидкими средами,
содержащими лактозу, глюкозу и другие
углеводы и многоатомные спирты.

На
полужидкие среды посев делают уколом
в глубину среды. При посеве
уколом пробирку со средой держат под
наклоном, вынимают проб­ку, обжигают
край пробирки.

Материал забирают
стерильной петлей и прокалывают
ею столбик питательной среды почти до
дна.

Для определения протеолитических
ферментов выделенную культуру
засевают на пептонную воду или МПБ. Для
этого в руку берут про­бирку
с посевом ближе к себе, а пробирку со
средой — дальше от себя.

Обе
пробирки открывают одномоментно,
захватив их пробки мизинцем и
краем ладони, обжигают края пробирок,
прокаленной охлажденной петлей
захватывают немного культуры и переносят
во вторую пробирку, растирают
в жидкой среде на стенке пробирки и
смывают ее средой.

При
посевах и пересевах внимание должно
быть обращено на соблюдение
правил стерильности, для того, чтобы не
загрязнять свои посевы
посторонней микрофлорой, а также не
загрязнять окружающую среду. Пробирки
маркируют и помещают в термостат для
инкубирования при температуре 37°Сна сутки.

Заключение

Учет результатов. Заключение по
исследованию. Учитывают результаты
идентификации и по совокупности
полученных данных, опираясь на
классификацию и характеристику типовых
штаммов, описанных в руководстве
(определитель Берджи, 1994-1996 гг.), определяют
вид выделенных культур.

Источник: https://studfile.net/preview/4104311/page:24/

Ссылка на основную публикацию
Adblock
detector