Описание бактериоскопического метода исследования и его виды

Бактериология как наука получила развитие в XIX веке благодаря внедрению бактериологических методик исследования.

Принцип и суть методики

Очень часто во время бактериологического исследования дополнительно проводится определение чувствительности выделенного патогенного микроорганизма к основным группам современных антибиотиков. Это дает возможность в последующем подобрать наиболее эффективную этиотропную терапию.

Когда проводится бактериологическая диагностика

Показанием к проведению бактериального исследования служит диагностика различных инфекционных заболеваний, к которым относятся:

• Специфические половые инфекции (заболевания с половым путем передачи) и воспалительная патология органов мочевыделительной системы – хламидиоз, микоплазмоз, уреаплазмоз, трихомониаз.
• Кишечные инфекции – сальмонеллез, дизентерия (шигеллез).
• Инфекционные процессы в органах системы дыхания – пневмония, бактериальные бронхиты, синуситы (бактериальное поражение слизистой оболочки костных околоносовых пазух), ангина, дифтерия.
• Гнойничковые и бактериальные заболевания кожи.
• Сепсис – заражение крови.
• Дисбактериоз слизистых оболочек – наиболее часто проводится для диагностики нарушения нормальной микрофлоры кишечника и влагалища у женщин.

Также данная методика может проводится для определения возбудителя гнойных процессов различной локализации. В первую очередь это необходимо для определения чувствительности выявленных микроорганизмов к антибиотикам, так как при развитии гнойного процесса возбудители часто являются устойчивыми к большинству антибиотиков.

Диагностика дисбактериоза при помощи бактериологического исследования дает возможность определить вид условно-патогенных микроорганизмов, а также их количество, на основании чего делается заключение о выраженности нарушения нормальной микрофлоры.

Материалом при бактериологическом исследовании служит моча, кровь, мазки из полости носа, уретры, влагалища, прямой кишки, кал, сперма у мужчин, мокрота. Выбор материала зависит от показаний к проведению данного метода лабораторной диагностики и локализации патологического процесса.

Расшифровка результатов

В большинстве случаев результат исследования основывается на 2-х показателях – факт наличия выявляемого микроорганизма (положительный или отрицательный результат), а также количество бактериальных клеток на единицу объема исследуемого материала (данный показатель имеет место только при положительном результате). Численность бактерий выражается в количестве колониеобразующих единиц (КОЕ). Чем выше данный показатель, тем большее количество бактерий в исследуемом материале. Также результат может включать показатели чувствительности выявленного микроорганизма к антибиотикам. Он обычно состоит из списка основных классов антибактериальных средств (тетрациклины, макролиды, цефалоспорины, пенициллины), напротив каждого из них отмечается результат – микроорганизмы чувствительные, слабо чувствительные или нечувствительные к антибиотику. Соответственно принципам рациональной антибиотикотерапии, для этиотропной терапии выбираются антибиотики, к которым патогенные микроорганизмы чувствительны.

На сегодняшний день бактериологическое исследование постепенно вытесняется другими методиками (ПЦР, ИФА) диагностики. Тем не менее это единственный метод, позволяющий определить чувствительность патогенных микроорганизмов к антибактериальным средствам.

Источник: https://prof-med.info/laboratornye-issledovaniya/111-bakteriologicheskoe-issledovanie

Бактериоскопический метод диагностики туберкулеза

Д.В. Шевчук, О.Е.Кузнецов

Прямая бактериоскопия

Бактериоскопический метод диагностики туберкулеза – исследование мазка после обработки и окраски по методу Циля-Нильсена. Микобактерии туберкулеза окрашиваются в красный цвет.

Преимущество этого метода заключается в быстроте получения результата, однако возможности его ограничены, в частности, известно, что положительный результат – обнаружение МБТ в мазке – может быть получен только при значительном содержании микробных тел в мокроте: от 50 тыс. микробных клеток в 1 мл.

Бактериоскопическому исследованию подлежат обратившиеся в медицинские учреждения лица:

• с явными симптомами туберкулеза органов дыхания
• с наличием продолжительного (более 3 недель) кашля, сопровождающегося выделением мокроты, особенно с кровью, и жалобами на боли в груди
• контактировавшие с больными, имеющими положительный результат бактериоскопического исследования и соответствующие симптомы заболевания
• имеющие рентгенологические изменения в легких, подозрительные в отношении туберкулеза.

Бактериоскопическому исследованию подвергается самый разнообразный материал: мокрота, промывные воды бронхов, желудка, экссудат, отделяемое ран, свищей, моча, ликвор, менструальная кровь и др. Наиболее часто исследуется мокрота.

Бактериоскопический метод диагностики туберкулеза легких – простой и экономичный, быстрый, выполнимый в любом медицинском учреждении, позволяющий при положительном результате мазка мокроты подтвердить диагноз туберкулеза. Недостатком метода можно считать его низкую чувствительность.

Для повышения чувствительности метода используют методики обогащения материала (флотация, седиментация) и окраску люминесцентными красителями.

Препарат готовят из гнойных частиц мокроты, которые выбирают из нескольких мест. Отобранные частицы тщательно растирают между двумя предметными стеклами до гомогенной массы. Высушивают на воздухе, фиксируют над пламенем. Мазки из жидкого содержимого (БАС, промывные воды, моча, экссудаты и т.д.) готовят из осадка материала, обработанного кислотой, после центрифугирования.

При этом избегают следующих ошибок:

• Изготовление слишком толстых препаратов (трудно искать МБТ)
• Фиксирование плохо высушенных мазков (получается плохая окраска)
• Недостаточная фиксация (наблюдается сползание препарата)
• Длительная фиксация над пламенем (обугливание мокроты, что сильно отражается на качестве мазка).

Препарат после окраски микроскопируют с иммерсионной системой при 1000- кратном увеличении.

Методика окраски:

После фиксации мазка в пламени горелки, он обрабатывается карболовым раствором фуксина.

Под действием входящего в его состав фенола (карболовая кислота) облегчается проникновение в дальнейшем анилинового красителя в микробную клетку, стенка которой «защищена» от проникновения обычных красителей слоем липидов и миколовых кислот.

Микобактерии обнаруживаются в препарате в виде тонких, прямых или слегка изогнутых палочек, красного или малинового цвета на синем фоне. Иногда они располагаются в препарате в виде римской цифры V, часто скоплениями. Иногда в их структуре определяются более интенсивные зерна (зернистые формы).

В связи с приемом противотуберкулезных препаратов, изменяющих морфологию микобактерий, могут обнаруживаться их ветвистые формы, бледно окрашенные палочки (частично утратившие кислотоустойчивость), осколки. Считают не менее 100 полей зрения, если не нашли КУБ то считают еще 100 полей зрения.

Рекомендуется еще один препарат докрасить пикриновой кислотой (0,25-0,5%). Просмотр двух препаратов (одного докрашенного метиленовым синим, а другого пикриновой кислотой) увеличивает процент нахождения МТ. При докрашивании препарата пикриновой кислотой фон препарата изменяется на желтый, тем самым облегчается процедура микроскопии микобактерий, окрашивающихся в красный или малиновый цвет.

Исследования бактериоскопическим методом может выполняться в следующих учреждениях:

• НИИ медицинского профиля
• Областная, городская и районная больница
• Взрослая и детская поликлиника
• Участковая больница
• Сельская врачебная амбулатория
• Психиатрическая и наркологическая больница и диспансер
• Санаторий
• ИТ учреждения

Люминесцентная бактериоскопия

Основана на различии свечения микроскопируемого объекта в ультрафиолетовом или коротковолновом спектре света. Окраска производится флюорохромами – органическими красителями (аурамин, родамин). МБТ под действием УФ-лучей в темном поле люминесцентного микроскопа светятся в виде золотистого цвета палочек.

Высокая контрастность микроскопической картины позволяет проводить исследование под меньшим увеличением (400-крат), увеличивая площадь одномоментно просматриваемого поля зрения, сокращая время, затрачиваемое на поиск единичных микобактерий, просмотр всего мазка.

Этот метод особенно подходит для исследования олигобациллярного материала.

Информативность бактериоскопии с применением флюорохромов по данным различных авторов может повышаться на 15 – 30%. Данный метод не применим для бактериоскопии мочи, в связи с наличием в ней большого количества микобактерий – сапрофитов.

Метод флотации

Метод основан на том, что после встряхивания водной суспензии легких углеводородов (ксилол, толуол, бензин и т.д.) и МБТ, а затем ее отстаивании, последние, адсорбируясь на поверхности пузырьков углеводорода, всплывают.

Образовавшееся на поверхности раствора флотационное кольцо содержит МБТ в большем количестве, чем остальная часть раствора и служит материалом для приготовления мазка.

Информативность бактериоскопии с применением флотационного метода может повышаться на 10%.

Методика (метод Поттенджера):

• свежевыделенную мокроту (не более 10-15 мл) помещают в узкогорлую бутылку
• приливают двойное количество 0,5% раствора едкой щелочи, смесь энергично встряхивают 10-15 мин.
• приливают 1 мл ксилола (можно бензина, толуола) и около 10 мл дистиллированной воды для разжижения мокроты, снова встряхивают 10-15 мин.
• доливают дистиллированную воду в таком количестве, чтобы уровень жидкости поднялся до горлышка бутылки.
• оставляют стоять на 40-50 мин
• образовавшийся верхний беловатый слой снимают по каплям пипеткой и наносят на предметные стекла, предварительно подогретые до 60 градусов (стекла для подогревания можно положить на металлический поднос и покрыть им водяную баню). Каждую последующую каплю наносят на предыдущую, подсушенную.
• препарат фиксируют, красят по Цилю-Нельсену и микроскопируют.

Метод седиментации

Основан на осаждении МБТ из раствора при добавлении хлороформа и центрифугировании. Из полученного осадка готовят мазок, окрашивают по Цилю- Нельсену и микроскопируют.

Источник: https://ftiza.su/bakterioskopicheskiy-metod-diagnostiki-tuberkuleza/

Бактериоскопическое исследование мокроты

Для проведения данных исследований необходимо следующее оснащение рабочего места:

1. Предметные и покровные стекла.
2. Шпатели и иглы.
3. Смесь Никифорова.
4. Газовая или спиртовая горелка.
5. Пастеровская пипетка с резиновым баллончиком.
6. Водяная баня с мостиком.
7. Иммерсионное масло.
8. Микроскоп.
9. Фильтровальная бумага.
10. Пинцеты Корне.
11. Бумажки Синева.
12. Основной фуксин.
13. 96° этиловый спирт.
14. Фенол.
15. Глицерин.
16. Концентрированная соляная кислота.
17. Метиленовая синька.
18. Дистиллированная вода.
19. Генцианвиолет.
20. Реактив Люголя.
21. Едкий натр (NaOH).
22. Бензин или ксилол.

Приготовление препаратов для бактериоскопического исследования

Для бактериоскопического исследования готовят обычно два препарата: один для обнаружения микобактерий туберкулеза и другой для обнаружения прочих микроорганизмов.

Для первого препарата отбирают те же частицы, которые были предназначены для микроскопии, для второго — гнойные частицы.

Взятый материал распределяют по предметному стеклу до получения достаточно тонкой ажурной сеточки (материал на первом стекле распределяют на 2/3 его поверхности, на втором — в центре).

Оба препарата фиксируют троекратным проведением над пламенем горелки. Первый препарат окрашивают по Цилю — Нильсену, второй — по Граму.

Окраска препаратов для бактериоскопического ис¬следования по Цилю-Нильсену и Граму

Окраска по Цилю-Нильсену

Для окраски препаратов по Цилю-Нильсену необходимы следующие краски и реактивы:

1. Фуксин Циля: основного фуксина 1 г, глицерина 4 капли, этилового спирта 96° 10 мл, карболовой кислоты (5% раствор фенола) 5 мл, дистиллированной воды 90 мл. К фуксину, помещенному в фарфоровую ступку, прибавляют глицерин, хорошо растирают, постепенно приливают карболовую кислоту, спирт и воду. Фильтруют.
2. 3% раствор солянокислого спирта: 3 мл концентрированной соляной кислоты удельного веса 1,19 и 97 мл 96° этилового спирта.
3. 0,2 % водный раствор метиленовой синьки — 1 г метиленовой синьки растворяют в 500 мл дистиллирован- вой воды.   

Техника окраски. На фиксированный препарат кладут полоску фильтровальной бумаги (уже и короче предметного стекла), на которую наливают в избытке фуксин Циля.

Затем препарат нагревают до появления паров (достаточно троекратно медленно провести его над пламенем горелки), дают ему остыть в течение 3-5 минут, сбрасывают с помощью пинцета бумажку, промывают препарат водой и наливают на него 3% раствор солянокислого спирта для обесцвечивания на 20 секунд. После этого препарат промывают водой и вновь повторяют обесцвечивание. Материал должен быть серовато-розового цвета. Затем на препарат на 20-30 секунд наливают 1: 500 водный раствор метиленовой синьки, краску сливают, препарат промывают водой и высушивают, установив в вертикальном положении на полоску фильтровальной бумаги.

Высушенный препарат рассматривают под микроскопом с иммерсией, с поднятым конденсором.

В препарате микобактерии туберкулеза (рис. 60) красного цвета, нежные, тонкие, слегка изогнутые, иногда зернистые. Иногда обнаруживают микобактерип туберкулеза в виде так называемых осколков (в составе тетрады Эрлиха).

Рис. 60. Микобактерии туберкулеза в мокроте. 1 — окраска по Цилю-Нильсену, 2 — в люминесцентном микроскопе.

Все остальные элементы, в том числе и другие микроорганизмы, окрашены в синий цвет. С целью обнаружения мпкобактерий туберкулеза препарат тщательно исследуют, продвигая от одного продольного края к другому и поперек мазка.

Во всех сомнительных случаях рекомендуют обработать препараты жавелевой водой
Результат исследования оформляют, используя следующую формулировку: «микобактерип туберкулеза не обнаружены» или «микобактерип туберкулеза обнаружены», и отмечают приблизительное их количество, например, «единичные в препарате», «единичные в поле зрения» и т. д.

В настоящее время находит все большее распространение люминесцентный способ обнаружения микобактерий туберкулеза в мокроте. Микобактерип туберкулеза имеют золотисто-желтое свечение на черном фоне препарата (рис. 60, 2).

В тех случаях, когда количество микобактерий туберкулеза в мокроте незначительно, для их обнаружения применяют метод обогащения (флотация), который состоит в следующем. В бутылку с нешироким горлышком (емкостью 250 мл) помещают 12-20 мл мокроты, добавляют равный объем 0,5% раствора КОН и встряхивают 5-10 минут.

Затем приливают около 10 мл дистиллированной воды и 0,5-1 мл бензина или ксилола, взбалтывают 10-15 минут и доливают дистиллированную воду гак, чтобы горлышко бутылки было заполнено. Смесь оставляют на 1-2 часа до образования на поверхности жидкости сливкообразного слоя.

На два предметных стекла, заранее расположенных на мостике над водяной баней, нагретой до 60-65°, каплями, с помощью пастеровской пипетки, 5-6 раз наносят сливкообразный слой, каждый раз после подсыхания предыдущей капли.

Мазки окрашивают фуксином Циля на водяной бане (без дополнительной фиксации) в течение 10 минут, промывают водой, 3-4 минуты обесцвечивают 3% раствором солянокислого спирта, вновь обмывают водой, докрашивают 0,2% водным раствором метиленовой синьки, высушивают и исследуют под микроскопом.

Окраска по Граму

Для окраски препаратов по Граму требуются следующие краски и реактивы:

1. Разведенный фуксин Циля (фуксин Пфейффера): 1 часть фуксина Циля + 9 частей дистиллированной воды.
2. Реактив Люголя.
3. 1 % спиртовой раствор генцианвиолета — 1 г генцианвиолета растворяют в 100 мл 96° этилового спирта. Этот раствор краски можно заменить бумажкой, приготовленной по методу Синева (белую фильтровальную бумажку пропитывают 1% спиртовым раствором генцианвиолета, затем высушивают и разрезают на мелкие квадратики соответственно размеру мазка).

Техника окраски. На фиксированный препарат накладывают бумажку Синева и смачивают ее водой (при отсутствии бумажки Синева ее заменяют белой фильтровальной бумажкой, на которую наносят несколько капель 1% спиртового раствора генцианвнолета). Через 1-2 минуты бумажку сбрасывают и на препарат наливают 1-2 капли реактива Люголя.

Через 1-2 минуты препарат обесцвечивают 1-2 каплями 96° этилового спирта до появления бледно-серой окраски материала, смывают водой, на 10-15 секунд наносят сруксин Пфейффера, после чего вновь смывают водой и высушивают. В препаратах могут быть обнаружены (рис.

61) стафилококки, стрептококки, диплококки, палочки Пфейффера, спирохеты Плаута-Венсана, актиномицеты и другие микроорганизмы.

Рис. 61. Различные микроорганизмы в мокроте: диплококки (1), палочки Пфейффера (2), стрептококки (3), стафилококки (4), диплобациллы Фридлендера (5), симбиоз Венсана (6), мицелий актиномицет (7).

Обеззараживание мокроты, посуды и предметов, бывших в соприкосновении с ней

После проведенного исследования мокроту сжигают или обеззараживают. Последнее достигается следующими способами: а) автоклавированием в течение одного часа при 1,5 атм.

; б) кипячением в течение одного часа в 1-2% растворе соды; в) обработкой 5% раствором лизола, карболовой кислоты или смесью, состоящей из равных объемов 5% раствора хлорамина и 5% раствора сернокислого аммония, в течение 12-24 часов.

После обеззараживания посуду тщательно моют водой и высушивают.

Металлические предметы (шпатели, иглы) обеззараживают прокаливанием над огнем. Во избежание переноса микроорганизмов из одной порции мокроты в другую шпатель и иглу немедленно прокаливают после отбора соответствующих частиц.

Покровные стекла опускают в небольшую плоскую чашечку с 40% раствором серной кислоты на 12-24 часа. Затем кислоту сливают, а стекла неоднократно промывают водопроводной и дистиллированной водой. Вымытые стекла высушивают и используют для последующих исследований.

Источник: http://ginekolog.my1.ru/publ/klinicheskie_issledovanija/mokrota/bakterioskopicheskoe_issledovanie_mokroty/40-1-0-771

Цитологическое и бактериоскопическое исследование в гинекологии — АНТИ-РАК

Для докторов разных специальностей бактериоскопический анализ служит важным диагностическим показателем при подозрении на инфицирование органа или системы органов. Гнойные выделения кожи требуют последующего лабораторного анализа с указанием видов поселившихся бактерий и назначения антибактериальных средств против конкретных возбудителей.

В гинекологии мазки на флору предупреждают размножение инфекции и развития более серьезного заболевания (или переход патологического процесса в хронический период). Широкое распространение приобрела бактериоскопия кала, мочи и крови. Методом определения патогенных бактерий пользуются офтальмологи, оториноларингологи, дерматологии и пр.

Не только гнойный воспалительный процесс является основанием для забора анализа. Лабораторная процедура проводится также при диспансерном обследовании.

Нередко в анализе биоптата обнаруживаются простейшие животные, микроскопические грибы.

Как следует из названия, бактериоскопический метод исследования заключается в том, что материал осматривают через микроскоп на предмет наличия патогенных бактерий. Этот метод довольно прост и не требует большого количества времени, сложного оборудования или больших затрат.

Окраска по Граму (механизм)

• Способы
  окрашивания микробов делятся на простые
  и сложные,
• или дифференциальные.

При
простой окраске употребляется
только один краситель,
чаще всего — фуксин
Пфейффера
(экспозиция 1-2 мин), или синька
Леффлера
(экспозиция 3-5 мин).

Их относят к группе
анилиновых
красителей.
Сложные, или дифференциальные способы
окраски бактерий основаны на особенностях
физико-химического строения микробной
клетки, и применяются для детального
изучения структуры клетки, также для
дифференциации данного микроба от
других.

Способность микробов воспринимать
красители называется тинкториальными

свойствами.

Этап	Продолжительность	Результат
Грамположительные	Грамотрицательные
Генциановый фиолетовый	1 – 2 минуты	Синие	Синие
Раствор Люголя	1 – 2 минуты	Синие	Синие
Этиловый спирт с последующим промыванием водой	½ минуты	Синие	Бесцветные
Водный фуксин	1 – 2 минуты	Синие	Красные

Простые	Сложные (основные)
Метод	Цель	Метод	Цель
Окраска метиленовым синим	Изучение: формы бактерий их расположения в мазке	Окраска по Граму (основной метод окраски в бактериологии)	Определение типа строения клеточной стенки
Окраска по Цилю-Нильсену	Выявление: — кислотоустойчивых бактерий (микобактерий) — спор
Окраска по Нейссеру	Выявление включений волютина и идентификация по их наличию коринебактерий
Окраска водным фуксином	Окраска по Бурри-Гинсу	Выявление капсул
Окраска по Морозову	Выявление: жгутиков трепонем вирусов натуральной и ветряной оспы
Окраска по Здрадовскому	Выявление хламидий
Окраска по Романовскому-Гимзе	Выявление: риккетсий спирохет простейших

ПОДРОБНОСТИ:   Как делают анализ на впч

Грамхарактеристика
основных форм бактерий

• 1. Шарообразные формы бактерий — кокки грамположительны (Гр ), за исключением гонококка,
  2. менингококка и катарального микрококка.
• • Цилиндрические формы: спорообразующие палочки — бациллы
  • и клостридии – Гр .

• Неспорообразующие (собственно бактерии) – грамотрицательны (Гр-), за исключением актиномицетной линии бактерий. В последнюю входят: коринебактерии, в т. ч. возбудитель дифтерии; микобактерии – возбудители туберкулёза, микобактериозов и

  актиномикоза.

• 1. Актиномикотическая друза окрашивается по Граму смешанно:
  2. аморфный центр — Гр , периферия — Гр-.
• • Извитые формы: вибрионы, спириллы, спирохеты –
  • Гр-.

• Риккетсии, хламидии — Гр-.

• Микроорганизмы с дефектами или не имеющие КС–Гр-.

Виды процедуры

1. 1)
   облигатные
   аэробы
   — им необходимо большое количество
2. кислорода;
3. 2)
   микроарофилы
   — кислород необходим в небольших
   количествах, меньше, чем в атмосферном
4. воздухе;

• 3)
  капнофилы
  — при культивировании необходимы O2
• и CO2;

1. 4)
   облигатные
   анаэробы
2. — не могут расти в присутствии кислорода;
3. 5)
   аэротолерантные
   анаэробы
   — могут расти в присутствии небольшого
4. количества кислорода;

• 6)
  факультативные
  анаэробы
  — используют как аэробное, так и анаэробное
  дыхание, или ферментирование. Это зависит
• от доступности кислорода.

Для определения кожного заболевания тли направления к другому специалисту при наличии симптомов дерматологического характера нередко требуется провести бактериологический анализ нескольких биоптатов, что и составляет классификацию бактериоскопии.

1. Уретральный мазок. Процедура отличается 100%-й стерильностью и использует стерильный ватный тампон, вводимый через уретру на небольшое расстояние. После извлечения тампона, он подлежит помещению в стерильный сосуд с пробкой.
2. Влагалищный мазок использует шпатель, которым проводят по стенкам влагалища и размазывают содержимое по предметному стеклу.
3. Цервикальный анализ использует тампон и гинекологическое зеркало. Процедура проникновения тампона отличается большей глубиной, чем при уретральном и вагинальном мазках.
4. Бактериоскопия осадка мочи проводится путем сдачи урины пациентом с пластиковом или стеклянном сосуде. У грудных и новорожденных детей для забора мочи приходится применять катетеризацию или устанавливать специальные мочесборники. Для анализа необходима свежая моча, в противном случае в ней начинаются процессы сбраживания и результаты бактериоскопии становятся недостоверными.
5. Бактериоскопическое исследование мокроты , проводимый путем мазка. Для дальнейшего исследования мазок пропитывают фуксином Циля и покрывают специальной бумагой. Перед рассматриванием под микроскопом мазок подвергается нагреванию и помещению в серной кислоте.
6. Вследствие огромного числа бактерий в кале патогенные организмы выявить непросто. Бактериоскопия кала проводится с окрашиванием мазка йодом. Наиболее чувствительные к йоду бактерии кала патогенного характера.

Про показания для взятия мазков на бактериоскопическое исследование читайте ниже.

Анализы в гинекологии

Гинекология весьма тонкая и деликатная наука, поэтому методов диагностики здесь весьма большое количество. Одними из самых простых и бюджетных методов диагностики, которые проводятся в любой женской консультации или гинекологических стационарах являются различные мазки на флору.

Существует несколько видов мазков на флору:

• Бактериоскопический анализ или микроскопическое исследование (непосредственно мазок на флору).
• Цитологический анализ – для обнаружения нетипичных клеток для этой локализации (ПАП – тест).
• Бактериология или бакпосев для выявления патологической флоры.

Многие женщины задаются вопросом: «Когда именно можно сдавать анализ, и на какой день менструального цикла это нужно делать?». Строгих ограничений в этом вопросе нет. Однако гинекологи рекомендуют сдавать мазки в начале менструального цикла, непосредственно через несколько дней после месячных. Сдавать мазок можно и непосредственно перед месячными.

Любая женщина должна помнить, что проведению любой диагностической процедуры должна предшествовать определенная подготовка. Она проводится с целью избежания ложных результатов, которые могут подтолкнуть врача на постановку неверного диагноза и назначение неподходящего лечения.

Подготовка к взятию мазка из влагалища (правило «двойки») включает в себя:

• За два дня до обследования нужно отказаться от половых актов.
• За две недели прекратить прием антибиотиков.
• За 2 дня прекратить прием гормональных препаратов и введение вагинальных суппозиториев и кремов.
• За 2 часа до процедуры не рекомендуется мочиться.

Соблюдение этих несложных рекомендаций позволит повысить объективность результатов мазка из влагалища в несколько раз.

Все виды анализов проводятся при помощи ватного тампона, смачиваемого в выделяющемся гное, других выделениях. Неприятные ощущения могут возникнуть при вагинальном и уретральном анализах.

Гнойные воспалительные процессы в урогенитальных органах вызывают обострение боли при вращении тампоном или движении шпателем. Интенсивность болей в подобных случаях снижает глубокое дыхание и старание расслабленности мышечной системы.

ПОДРОБНОСТИ:   Кольпо Тест PH (Определение PH вагинальной жидкости)

Про норму и расшифровку анализов на бактериоскопию мокроты, мазка и т.п. у женщин и мужчин читайте ниже.

Средняя стоимость процедуры

Каждый вид анализа проводится под контролем врача. Обычный дерматологический анализ не требует специальной подготовки, если доктор не прописал особый подготовительный алгоритм.

Уретральный или вагинальный анализы желательно проводить при отсутствии подмывания и мочеиспускания в течение нескольких часов перед сдачей анализа.

Стоимость бактериоскопической процедуры варьирует в зависимости от клиники и региона проживания. Средняя стоимость бактериоскопии – 550 рублей. К этой цене возможно добавится взятие мазка или соскоба, которое не превышает 300-350 рублей.

Противопоказания для проведения

• Микроскопическое исследование дает общие представления о состоянии кожи пациента, оценивает степень развития воспалительного процесса, визуально оценивает поражение слизистых оболочек.
• Если микроорганизм часто встречается при дерматологических заболеваниях, то прямая микроскопия является окончательным диагностическим вариантом анализа.
• Менее распространенные патогенные микроорганизмы нуждаются в дальнейшей диагностике бакпосевом.

В том числе не обойтись без диагностики при сибиреязвенном карбункуле, буллезном дерматите, большинстве видов рака, в т.ч. шейки матки.

Абсолютных противопоказаний к бактериоскопии в дерматологической практике не существует. Целесообразность проведения анализа определяется лечащим доктором.

• При наличии струпьев или иных патологических образований проводится мазок.
• Пораженные участки кожи без образований нуждаются в соскобе перед проведением микроскопического исследования.

 

Источник: https://babblecat.ru/citologicheskoe-i-bakterioskopicheskoe-issledovanie-v-ginekologii-anti-rak/

Методы бактериологического исследования

Возможности использования бактериологического исследования при глазных заболеваниях ограничены пределами доступности патологического очага. При расположении его в заднем отрезке глаза получить материал для исследования часто очень Трудно и возможность бактериологической диагностики в таких случаях, естественно, исключается.

Основная область применения бактериологической диагностики в глазной практике — это заболевания наружного отдела глаза, а также проникающие ранения, при которых материал для исследования может быть получен во время хирургической обработки раны или при извлечении инородного тела.

Вообще надо заметить, что при оперативных вмешательствах круг возможностей для получения бактериологического материала значительно расширяется.

Получение материала для исследования

Для получения материала из конъюнктивального мешка пользуются платиновой петлей (при ее отсутствии можно использовать петлю, изготовленную из нити спирали электроплитки, или другой инструмент (стеклянная палочка, шпатель и т. п.), которую предварительно стерилизуют прокаливанием в пламени спиртовой горелки.

Оттянув нижнее веко, остывшей петлей захватывают комочек конъюнктивального отделяемого из глубины нижнего свода. При этом необходимо избегать прикосновения петли к коже и краям век, чтобы не занести в материал постороннюю микрофлору. Брать материал желательно до начала лечения и в утренние часы, когда отделяемое бывает более обильным.

При отсутствии слизи и гноя (например, при исследовании здоровой конъюнктивы перед операциями) следует использовать слезную жидкость или слегка поскоблить поверхность соединительной оболочки (по Линднеру).

Но лучше в таких случаях применить методику Элыннига: впустить в конъюнктивальный мешок из пастеровской пипетки одну каплю стерильного физиологического раствора или бульона и через несколько секунд отсосать эту каплю.

По тем же общим правилам получают материал из слезного мешка, выдавливая его содержимое, и с края века при язвенном блефарите, сняв предварительно корочку с язвы.

Большая осторожность требуется при взятии материала с роговой оболочки, особенно при наличии ползучей язвы роговицы. Петлю (или другой тупой инструмент) следует направлять косо к поверхности язвы и брать материал из прогрессирующего края ее. При этом необходима анестезия (3 капли 1% дикаина) и фиксация глазного яблока.

В качестве материала для исследования при проникающих ранениях глаза можно использовать отделяемое раны (если оно имеется), захватив его петлей или марлевым тампоном, пунктат передней камеры или извлеченное инородное тело, которое помещают в стерильную пробирку с 1–2 мл физиологического раствора. После встряхивания пробирки раствор используют для исследования.

При эндофтальмите может возникнуть потребность в получении материала из стекловидного тела. Пункция глазного яблока проводится после анестезии (1 мл 2% раствора новокаина под конъюнктиву) острой и с достаточно широким просветом иглой, вкалываемой ближе к экватору. Отсасывается 0,3–0,5 мл внутриглазного содержимого.

Полученный материал подвергается изучению с целью выявления микроба и определения его вида (микробиологический диагноз). Материал может изучаться:

1. на предметном стекле (бактериоскопический метод);
2. в посевах (собственно бактериологический метод);
3. в эксперименте на животном (биологический метод).

Бактериоскопический метод

может быть использован в условиях любого глазного стационара при наличии несложного лабораторного оборудования и некоторых реактивов.

Для этого необходимо иметь следующее:

1. металлическую петлю;
2. чистые предметные стекла (на чистом стекле капля воды расплывается, а не принимает шаровидную форму);
3. ванночку с подставками для предметных стекол (стеклянные палочки или толстая медная проволока);
4. дистиллированную воду;
5. спирт;
6. пинцет;
7. фильтровальную бумагу;
8. раствор Люголя (йода 1 г, йодистого калия 2 г, дистиллированной воды 300 мл);
9. растворы красок (лучше в склянках, закрытых пипетками с резиновыми баллончиками).

Для очистки новые стекла кипятят в 1% растворе соды (можно использовать золу), а затем промывают водой, слабой соляной кислотой и вновь водой. Стекла, бывшие в употреблении, помещают на 1–2 часа в серную кислоту, после чего кипятят в растворе соды, промывают водой и опускают в 96° спирт. Хранят стекла либо в спирте, либо, вытерев спирт, сухими, в банках с притертой пробкой.

Наиболее употребительные краски: карболовый фуксин Циля (фуксина основного 1 г, кристаллической карболовой кислоты 5 г, спирта 96° 10 мл, глицерина — несколько капель, дистиллированной воды 100 мл).

Для окраски фуксин Циля обычно разводят дистиллированной водой в 10 раз (разведенный, или водный фуксин). Метиленовая синька (метиленовой синьки 10 г, спирта 96° 100 мл).

Из нее готовят щелочную синьку Леффлера (спиртового раствора синьки 30 мл, 1% калийной или натриевой щелочи 1 мл, дистиллированной воды 100 мл). Карболовый генцианвиолет (готовится так же, как карболовый фуксин Циля).

Микробов изучают либо в живом виде (способы «раздавленной» и «висячей» капли), либо убитыми (в окрашенном препарате). Исследование в живом виде в основном выявляет способность микробов к активному движению, тогда как окрашенные препараты позволяют хорошо изучить их морфологию.

Различают простые способы окраски, когда обычно употребляется одна краска, и сложные способы окраски, выявляющие некоторые особенности физико-химического строения микробной клетки и имеющие поэтому дифференциально-диагностическое значение.

Техника приготовления окрашенных препаратов сводится к следующему. Материал наносят на чистое предметное стекло и равномерно распределяют по поверхности в виде кружка или овала. Мазок должен быть достаточно тонким.

Стекло с высушенным препаратом берут за края большим и указательным пальцами мазком кверху и фиксируют троекратным проведением через пламя спиртовой горелки (на границе светлой и темной его части). При достаточной фиксации ощущается легкое жжение в пальцах.

Зафиксированный мазок окрашивают. Готовят несколько препаратов, по меньшей мере два, один из которых окрашивают простым способом (метиленовая синька Леффлера, разведенный фуксин Циля), другой — по способу Грама.

Окрашивание по Леффлеру:

1. на мазок кладут кусочек фильтровальной бумаги и наливают раствор синьки Леффлера на 3–5 минут;
2. препарат промывают дистиллированной водой и высушивают.

Окрашивание по Граму:

1. на мазок кладут кусочек фильтровальной бумаги, на который наливают раствор генцианвиолета на 1–2 минуты;
2. сливают краску, снимают бумажку и, не промывая водой, наливают яа препарат люголевский раствор на 1 минуту; при этом мазок чернеет;
3. сливают люголевский раствор и обесцвечивают мазок спиртом (лучше путем погружения препарата в стаканчик со спиртом до прекращения отхождения фиолетовых струек);
4. тщательно промывают водой;
5. заливают мазок разведенным фуксином на 1–2 минуты;
6. сливают краску, промывают препарат водой и высушивают.

Удобный способ Грама в модификации Синева, который предложил пользоваться заранее приготовленными кусочками фильтровальной бумаги, пропитанной раствором генцианвиолета и высушенной. На мазок предварительно наносят 2–3 капли воды и затем кладут эти кусочки бумаги. Дальше поступают, как описано выше.

Микроскопию мазков производят с иммерсионным объективом. При окраске по Леффлеру все микробы окрашиваются в синий цвет; при окраске по Граму — либо в сине-фиолетовый (грамположительные микробы), либо в красный цвет (грамотрицательные микробы).

Ограниченное число микробов, участвующих в заболеваниях наружного отдела глаза, и их характерные морфологические признаки нередко позволяют поставить правильный микробиологический диагноз уже с помощью одного только бактериоскопического исследования.

Бактериологический метод

становится необходимым в тех случаях, когда изучение в мазках оказывается недостаточным для установления вида микроба или возникает потребность в определении чувствительности выделенного возбудителя к антибактериальным препаратам.

Отсылая за подробным ознакомлением с бактериологическим методом к специальным руководствам по микробиологии, остановимся здесь лишь на принципах этого метода. Первый этап работы сводится к выделению отдельных видов микробов, т. е. к получению чистых культур.

Для этого прибегают к механическому разобщению материала при посеве и к использованию сред, наиболее пригодных для развития предполагаемых возбудителей (элективные среды).

Путем пересева отдельных колоний, выросших на среде, получают чистую культуру, которую исследуют под микроскопом (готовят мазки) и пересевают на дифференциально-диагностические среды для изучения биохимических свойств возбудителя.

Высокая требовательность большинства патогенных для глаза микробов в условиях культивирования обусловила преимущественное применение для их выделения элективных сред, содержащих нативный белок.

Таковы, например, среда Эльшнига (одна часть лошадиной сыворотки или асцитической жидкости и две части бульона), свернутая сыворотка Леффлера (три части сыворотки и одна часть бульона с 1% пептона, 0,5% NaCl и 1% виноградного сахара), кровяной агар Левенталя (агар и 5–10% дефибринированной крови).

Что касается определения чувствительности микробов к антибиотикам, то наиболее простой способ такого определения заключается в использовании специально изготовляемых промышленностью дисков из фильтровальной бумаги, пропитанных растворами антибиотиков и высушенных в вакууме.

Затем на поверхность агара накладывают диски с различными антибиотиками на расстоянии 2 см друг от друга и от края чашек. Чашки ставят в термостат (37°) и на следующий день по величине зоны задержки роста вокруг дисков судят о степени чувствительности микроба к испытуемым антибиотикам.

Отсутствие зоны задержки роста указывает на нечувствительность микроба к данному антибиотику.

Биологический метод

в глазной практике применяется только в тех случаях, когда при затрудненной диагностике токсигенное свойство может оказаться решающим в определении вида микроба (например, при дифференциальной диагностике дифтерийной палочки и палочки ксероза).

Лабораторная диагностика вирусных заболеваний глаза

В настоящее время специальное изучение вирусов, в том числе вируса трахомы (рис. 77), осуществляется с помощью культивирования их в культурах тканей (куриный эмбрион, асцит-карцинома мышей и др.) и электронной микроскопии.

Рис. 77. Клеточные включения при трахоме.

В клинической практике для диагностики трахомы применяется метод цитологического изучения соскоба конъюнктивы на наличие или отсутствие телец (включений) Провачека—Гальберштедтера.

Для этого тупым скальпелем или краем предметного стекла соскабливают эпителиальный покров конъюнктивы (без крови), который наносят тонким слоем на предметное стекло, в течение 5 минут подсушивают на воздухе и фиксируют путем опускания на 15–20 минут в стаканчик с метиловым спиртом или смесью Никифорова (этиловый эфир и абсолютный спирт в равном количестве). Окраску производят в течение 3–4 часов свежеприготовленным раствором краски Романовского—Гимза (из расчета одна капля краски на 1 мл дистиллированной воды). Затем препарат промывают текучей водой, подсушивают на воздухе и исследуют под микроскопом. При этом ядра эпителиальных клеток оказываются окрашенными в розовый цвет, протоплазма — в светло-синий, включения — в синий, сине-фиолетовый цвет (рис. 77). Последние представляются в виде кокковидных образований, расположенных среди мелкозернистой массы, и признаются носителями трахоматозного вируса. Они чаще обнаруживаются в свежих случаях нелеченой трахомы, но могут встречаться и при паратрахомных конъюнктивитах.

Исследования последних лет выявили новую форму контагиозного вирусного заболевания глаз — эпидемический кератоконъюнктивит, а цитологическое изучение конъюнктивального соскоба при этом заболевании позволило обнаружить в эпителиальных клетках своеобразные включения, совершенно отличные от телец Прсвачека (Б. Л. Поляк, Н. В. Плошинская).

Э. С. АВЕТИСОВ

Источник: https://sisibol.ru/glazbol/29.shtml

Бактериологический метод лабораторной диагностики инфекционных болезней

10354

Применение бактериологического метода дает возможность выделить возбудителя в чистой культуре из материала, полученного от больного, и идентифицировать его на основании изучения комплекса свойств. Большинство бактерий способны к культивированию на различных искусственных питательных средах (кроме хламидий и риккетсий), поэтому бактериологический метод имеет важное значение в диагностике многих инфекционных болезней. 

В случае получения положительного результата бактериологический метод позволяет определить чувствительность выделенного возбудителя к антимикробным препаратам. Однако эффективность указанного исследования зависит от многих параметров, в частности от условий сбора материала и его транспортировки в лабораторию. 

К основным требованиям, предъявляемым к отбору и транспортировке материала для бактериологического исследования, относят: 

• взятие материала до начала этиотропного лечения; 
• соблюдение условий стерильности при сборе материала; 
• техническую правильность сбора материала; 
• достаточное количество материала; 
• обеспечение температурного режима хранения и транспортировки материала; 
• сведение к минимальному промежутка времени между сбором материала и посевом на плотные питательные среды. 

Транспортировка материала в лабораторию должна быть осуществлена по возможности немедленно, но не более чем в течение 1—2 ч после его взятия. Пробы материала должны находиться при определенном температурном режиме; в частности, стерильные в норме материалы (кровь, спинномозговая жидкость) хранят и доставляют в лабораторию при 37 °С.

Нестерильные материалы (моча, отделяемое дыхательных путей и др.) хранят при комнатной температуре не более 1—2 ч или не более суток при 4 °С (условия бытового холодильника).

При невозможности доставки проб в лабораторию в регламентированные сроки рекомендуют использовать транспортные среды, предназначенные для сохранения жизнеспособности возбудителей в условиях консервации. 

Кровь для исследования следует брать у больного в период подъема температуры тела, в начале появления лихорадки.

Пробу крови в количестве 10 мл у взрослого и 5 мл у детей засевают минимум в два флакона со средой для аэробных и анаэробных микроорганизмов в соотношении 1:10. Желательно однократное исследование и артериальной крови. 

Взятие спинномозговой жидкости (СМЖ) производит врач при люмбальной пункции в количестве 1—2 мл в сухую стерильную пробирку. Пробу немедленно доставляют в лабораторию, где к ее исследованию приступают также немедленно. При отсутствии такой возможности материал сохраняется при 37 °С в течение нескольких часов.

Существенно повышает количество положительных результатов бактериологического исследования посев 1—2 капель СМЖ в пробирку, содержащую полужидкую среду с глюкозой, и в чашку Петри с «кровяным» агаром.

Для пересылки материала используют изотермальные ящики, грелки, термосы или любую другую упаковку, где поддерживается температура около 37 °С. 

Испражнения для бактериологического исследования отбирают с помощью стерильных деревянных шпателей в количестве 3—5 г в стерильный сосуд с плотно закрывающейся крышкой. Исследование взятого материала должно быть начато не позже чем через 2 ч.

Если невозможно приступить к исследованию в течение этого времени, следует отобрать небольшое количество материала, который помещают в соответствующую транспортную среду. При отборе испражнений следует стремиться направлять для исследования патологические примеси (слизь, гной, частицы эпителия и др.

), если они имеются, избегая попадания в материал примеси крови, обладающей бактерицидными свойствами. 

Для взятия материала могут быть использованы ректальные тампоны (с ватным наконечником). Тампон должен быть увлажнен стерильным изотоническим раствором натрия хлорида или транспортной средой (но не масляным гелем).

Его вводят per rectum на глубину 5—6 см и, поворачивая тампон, осторожно его извлекают, контролируя появление на тампоне фекальной окраски.

Мочу (средняя порция свободно выпущенной мочи) в количестве 3—5 мл собирают в стерильную посуду после тщательного туалета наружных половых органов. Предпочтительней отбирать утренние порции мочи.

Желчь собирают во время дуоденального зондирования в процедурном кабинете отдельно по порциям А, В и С в три стерильные пробирки, соблюдая правила асептики.

Промывные воды желудка собирают в стерильные банки в количестве 20—50 мл. Следует иметь в виду, что промывание желудка в этих случаях проводят только индифферентными (не обладающими бактериостатическим или бактерицидным действием на микроорганизмы) растворами — лучше кипяченой водой (без добавления соды, перманганата калия и пр.). 

Мокрота. Утреннюю мокроту, выделяющуюся во время приступа кашля, собирают в стерильную банку. Перед откашливанием больной чистит зубы и полощет рот кипяченой водой с целью механического удаления остатков пищи, слущенного эпителия и микрофлоры ротовой полости. 

Промывные воды бронхов. При бронхоскопии вводят не более 5 мл изотонического раствора натрия хлорида с последующим его отсасыванием в стерильную пробирку. 

Отделяемое глотки, ротовой полости и носа. Материал из ротовой полости берут натощак или через 2 ч после еды стерильным ватным тампоном либо ложечкой со слизистой оболочки и ее пораженных участков у входов протоков слюнных желез, поверхности языка, из язвочек. При наличии пленки последнюю снимают стерильным пинцетом.

Материал из носовой полости забирают сухим стерильным ватным тампоном, который вводят в глубь полости носа. Материал из носоглотки берут стерильным заднеглоточным ватным тампоном, который осторожно вводят через носовое отверстие в носоглотку. Если при этом начинается кашель, тампон не удаляют до окончания кашля.

Для проведения анализа на дифтерию исследуют одновременно пленки и слизь из носа и глотки, беря материал разными тампонами. 

Исследуемый материал засевают на плотные питательные среды, используя специальные методики для получения роста отдельных колоний микроорганизмов, которые далее отсевают с целью выделения чистой культуры возбудителя.

Определенные виды бактерий выделяют, используя элективные (избирательные) среды, которые задерживают рост посторонних микроорганизмов или содержат вещества, стимулирующие рост определенных патогенных микробов. 

Выделенные на питательных средах микроорганизмы идентифицируют, т.е. определяют видовую или типовую их принадлежность.

В последнее время для идентификации в практике здравоохранения используют микротест-системы, представляющие собой панели с набором дифференциально-диагностических сред, что ускоряет исследование.

Микротест-системы применяют и для определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам методом разведения антибиотика в жидкой питательной среде. 

Выделение из крови при соблюдении всех правил асептики условно-патогенных микроорганизмов (эпидермальный стафилококк, кишечная палочка) и даже сапрофитов следует считать проявлением бактериемии, особенно если эти микробы обнаружены больше чем в одной пробе материала или в разных субстратах (кровь, моча), поскольку при снижении иммунореактивности организма эти и другие «непатогенные» микроорганизмы могут быть возбудителями инфекционных процессов, в том числе и сепсиса. 

Определенную сложность представляет трактовка результатов бактериологического исследования нестерильных сред, а именно доказательство этиологической роли условно-патогенных микроорганизмов.

В этом случае учитывают в комплексе такие показатели, как вид выделенных культур, количество микробных клеток данного вида в материале, повторное их выделение в течение заболевания, присутствие монокультуры или ассоциации микроорганизма.

Опубликовал Константин Моканов

Источник: https://medbe.ru/materials/infektsionnye-zabolevaniya/bakteriologicheskiy-metod-laboratornoy-diagnostiki-infektsionnykh-bolezney/